如何分离外周血单个核细胞
发布时间：2025-10-22 21:52:43作者：乐乡之乐
【如何分离外周血单个核细胞】在免疫学、细胞生物学及临床研究中，外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs）是重要的研究对象。PBMCs 包括淋巴细胞（如T细胞、B细胞、NK细胞）和单核细胞等，它们在免疫应答、炎症反应及疾病诊断中具有重要作用。因此，如何高效、准确地从全血中分离出PBMCs是一项基础而关键的技术。
一、实验原理
PBMCs的分离主要基于密度梯度离心法。利用Ficoll或Lymphoprep等密度梯度介质，根据细胞的密度差异进行分离。红细胞和粒细胞密度较大，沉降到管底；而PBMCs密度较低，悬浮于介质与血浆之间，形成单个核细胞层。
二、实验步骤总结
| 步骤 | 操作内容 | 注意事项 |
| 1 | 收集抗凝全血 | 使用EDTA或肝素抗凝，避免使用柠檬酸钠 |
| 2 | 稀释全血 | 加入等体积的PBS或生理盐水，防止细胞聚集 |
| 3 | 分层加入密度梯度介质 | 垂直缓慢加入，避免混合 |
| 4 | 密度梯度离心 | 400g，室温，持续30分钟，不制动 |
| 5 | 收集单个核细胞层 | 用移液器小心吸取中间层 |
| 6 | 洗涤细胞 | 用PBS重悬，低速离心洗涤2次 |
| 7 | 细胞计数与活力检测 | 使用台盼蓝染色或自动细胞计数仪 |
三、关键点提示
- 抗凝剂选择：不同抗凝剂对细胞活性有影响，建议优先使用EDTA。
- 操作速度：分层时要慢，避免破坏密度梯度。
- 离心参数：不同的设备可能需要调整转速和时间。
- 细胞保存：若不能立即使用，可低温保存或冻存。
四、常见问题与解决方法
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 单个核细胞层不明显 | 密度梯度介质未正确配制 | 重新配置介质，确保浓度准确 |
| 红细胞污染严重 | 离心条件不当 | 调整离心参数，增加洗涤次数 |
| 细胞活性低 | 操作时间过长或温度控制不好 | 控制操作时间，保持低温环境 |
通过上述方法，可以有效地从外周血中分离出高纯度、高活性的PBMCs，为后续的细胞功能研究、免疫治疗及科研实验提供可靠的细胞来源。
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